Genética Molecular - AVALIAÇÃO FINAL

Genética Molecular - AVALIAÇÃO FINAL – 2º sem 2011 (cada questão vale 1,0 ponto)

1)    Depois da replicação a informação genética também pode sofrer danos. Dímeros de timina são formados pela ação da radiação UV no DNA. Que enzima corrige este problema e como atua?

R: A enzima é a fotoliase; ela quebra o anel ciclobutano formado entre as duas timinas, refazendo as ligações duplas dos carbonos e separando as timinas adjacentes.

2)    Na ausência de vírus ou outros agentes infecciosos, qual é o alvo final da interferência de RNA?

a)  a fita sense do DNA

b)  a fita molde de certo gene

c)  o cDNA de determinado gene

d)  o mRNA de algum gene

e)  a fita dupla de DNA de algum gene, quando desnaturada

Comentário: o alvo da interferência de RNA será sempre ou um mRNA específico: ele será clivado ou sua tradução será bloqueada

3)    A densidade dos genes nos procariotos é uniforme. Porque?

R: Por duas razões simultaneamente: a) na ausência de introns, o tamanho dos genes não varia muito e b) na ausência de regiões intergênicas repetidas, o espaço entre dois genes adjacentes tende a ser pequeno e relativamente uniforme.

4)    O mecanismo de vazamento do operon lac garante seu funcionamento porque:

a)  permite um suprimento basal de b-galactosidase, essencial para manter níveis de ATP mínimos na célula;

b)  permite uma síntese de pequenas quantidades de permease que garante a entrada na célula da lactose, indutor do sistema;

c)  permite a eficiente degradação da lactose que entrar na célula, antes mesmo da síntese de novo de beta-galactosidase;

d)  permite que a produção do repressor seja interrompida pela entrada de pequenas quantidades de lactose;

e)  permite que a degradação do repressor ocorra sempre que houver lactose no meio de cultura.

Comentário: a aparente contradição no funcionamento do operon lac, isto é, a necessidade de entrada da lactose para disparar a síntese das três proteínas, entre as quais o próprio transportador da lactose (a permease), é resolvida pelo vazamento. De fato, todos os operons vazam, porque a ligação entre quaisquer duas moléculas nunca é eterna, sempre será desfeita depois de algum tempo, e isso é expresso pela constante da afinidade. Assim, do ponto de vista de importância para o funcionamento do operon, o que importa é a síntese de pequenas quantidades de permease na ausência de lactose no meio.

5) Os eucariotos podem, em muitos casos, formar várias proteínas a partir de um único gene porque:

a) têm um processo de glicosilação da proteína após a tradução.

b) retiram exons do mRNA maduro, após o processo de splicing.

c) adicionam exons de outros genes aos do gene que está sendo processado.

d) têm o recurso do splicing alternativo.

e) podem induzir a hipermutação somática.

Comentário: das opções acima as únicas que existem são a glicosilação e o splicing alternativo, o resto é falso. Ora, a glicosilação não cria efetivamente uma proteína nova, apenas adiciona açúcares a alguns aminoácidos do polipeptídeo.

6) Se construirmos num vetor de expressão uma biblioteca de cDNA de estame de flores de soja  e triarmos os clones com anticorpos produzidos contra sépalas de flores da mesma espécie:

a) encontraremos clones reativos porque há genes em comum expressos nos dois tecidos

b) encontraremos clones reativos porque é comum a contaminação de material das duas origens na hora da extração do ácido nucléico

c) não encontraremos clones reativos porque o elenco de genes expressos nos dois tecidos é completamente diferente

d) não encontraremos clones reativos porque o genoma das células do estame é haplóide

e) não encontraremos clones reativos porque o processo de construção da biblioteca exclui os clones que possam estar representados em outros tecidos.

Comentário: Os anticorpos serão produzidos contra as proteínas e outras moléculas das células das sépalas, mas na hora da triagem apenas as proteínas expressas no estame estarão disponíveis para ligação com os anticorpos. Então, anticorpos produzidos contra as proteínas constitutivas (que são expressas em quase todos os tecidos de um organismo) obtidos contra as proteínas de sépala vão se ligar as proteínas do mesmo tipo expressas no estame e representadas na biblioteca.

7) Indique se as afirmações sobre as várias etapas de regulação gênica em eucariotos são verdadeiras (V) ou falsas (F).

a) a alteração da cromatina é irrelevante (F)

b) a formação do complexo transcricional é a etapa mais importante no controle da expressão gênica (V)

c) no processamento do mRNA o splicing alternativo é responsável pela expansão do proteoma (V)

d) após a produção do mRNA, a célula obrigatoriamente produzirá a proteína codificada (F)

e) a partir de um mRNA maduro pode-se produzir proteínas distintas por processamento da cadeia polipeptídica original (V ou F)

Comentário: apenas a última opção merece um comentário – se pensarmos que algumas vezes uma proteína é processada na célula antes de ser usada por ela, poderíamos imaginar que o processamento produz proteínas diferentes, mas de fato o que se faz é alterar a proteína retirando dela trechos, em geral na extremidade amino. Ainda assim as duas opções serão aceitas.

8) Em busca de portadores sãos de uma doença recessiva de expressão tardia  ligada a um gene cópia única no genoma amplificamos um trecho do gene e empregamos uma enzima de restrição que só corta o produto de PCR obtido do alelo normal deste gene. Entre trinta indivíduos, 80% apresentou duas bandas no ensaio, 1 apresentou 1 banda e o restante 3 bandas. Em que grupos eles se distribuem, respectivamente?

a) Portadores sãos, afetados e homozigotos normais

b) Afetados, portadores sãos e homozigotos normais

c) Homozigotos normais, afetados e portadores sãos

d) Portadores são, homozigotos normais e afetados

e) Homozigotos normais, portadores sãos e afetados

Comentário: Os homozigotos normais terão os dois alelos amplificados cortados pela enzima e apresentarão, portanto, duas bandas na eletroforese. O afetado terá os dois alelos sem sítios de restrição para a enzima e apresentarão uma única banda no gel. Por fim os portadores são terão os dois tipos de alelos e apresentarão três bandas.

9) Como é possível fazer uma PCR com um único primer, que nome tem a técnica e qual sua aplicação?

R: Reduzindo a temperatura de pareamento para que o primer possa hibridizar, com baixa especificidade, em diferentes locais do DNA alvo (que deve ser muito longo, de preferência o DNA total do organismo a ser estudado. A técnica é conhecida como RAPD e é usada para estudos filogenéticos, entre outros.

10) Os genomas de mitocôndrias podem ser muito diferentes de uma espécie para outra de organismo, mas as funções das mitocôndrias são essencialmente as mesmas. Como se explica esta disparidade?

R: A diferente taxa de transferência dos genes da mitocôndria para os o genoma da célula hospedeira.